Dl -1, 4- dithiothreitol 丨 cas 3483-12-3

Dl -1, 4- dithiothreitol 丨 cas 3483-12-3 je malé molekuly redukující činidlo široce používané v biochemii, molekulární biologii a biotechnologii. Hraje klíčovou roli při udržování sníženého stavu proteinů, zejména těch, které citlivé na oxidační a disulfidovou vazbu. DTT je preferován pro mnoho laboratorních aplikací kvůli své silné redukční síle, specificitě a nízké toxicitě za normálních laboratorních podmínek.

1. Redukční činidlo v biochemickém výzkumu
√ Stabilizace struktury proteinu
● DTT se běžně používá k přerušení disulfidových vazeb v proteinech snížením vazeb cystinu (disulfidu) na zbytky cysteinu (thiolu).
● To pomáhá při denaturace, opětovném proteinu nebo analýze, zejména v technikách, jako je SDS-PAGE, Western blotting a hmotnostní spektrometrie.
√ Aktivace a konzervace enzymu
● Mnoho enzymů ztrácí aktivitu v důsledku oxidace kritických cysteinových zbytků. DTT pomáhá zachovat aktivitu enzymu udržováním těchto thiolů v redukované a aktivní formě.

2. Příprava vzorku v molekulární biologii
√ Izolace RNA
● DTT se přidává do lytických pufrů během extrakce RNA, aby se inhibovaly enzymy RNázy, které vyžadují, aby zůstaly intaktní disulfidové vazby, aby zůstaly aktivní.
● Pomáhá zajistit vysoce kvalitní RNA pro aplikace jako RT-PCR, QPCR a transkripční sekvenování.
√ Reverzní transkripce (RT)
● DTT zvyšuje účinnost enzymů reverzní transkriptázy v syntéze cDNA stabilizací thiolových skupin enzymu a udržováním optimální aktivity.

3. studie strukturální biologie a proteinu
● dl -1, 4- dithiothreitol 丨 cas 3483-12-3 se rozsáhle používá v protokolech skládání a opětovného proteinu, protože napodobuje redukční prostředí cytosolu.
● Umožňuje vědcům studovat konformační změny závislé na disulfidu a napomáhá pochopení vztahů mezi proteinovými strukturami.

4. lýza buněk a tkáně
● Zahrnuty do lytických pufrů pro narušení buněk za účelem ochrany thiolových skupin proteinu během extrakce.
● Zabraňuje oxidačním artefaktům a zajišťuje přesnou analýzu redoxně citlivých proteinů.

5. Studie redoxní chemie a redoxní potenciální studie
● DTT je nástroj pro udržování definovaného redoxního prostředí in vitro.
● Používá se k simulaci podmínek intracelulárního redukujícího se ve studiích zahrnujících signální dráhy citlivé na redoxně, jako jsou ty, které se týkají thioredoxinů a glutaredoxinů.

6. Pracovní postup DNA a RNA
● Používá se v reakcích, kde nukleázy nebo jiné oxidační enzymy mohou degradovat nukleové kyseliny.
● Pomáhá zajistit čistou a efektivní manipulaci s DNA\/RNA pro následné aplikace, jako je klonování, transfekce a sekvenování.

√ Silná a specifická redukční síla
● dl {{0}}, 4- dithiothreitol 丨 CAS 3483-12-3 je výkonný redukční činidlo se standardním redoxním potenciálem –0,33 V, což účinně snižuje disulfidové vazby i při nízkých koncentracích.
√ Stabilizuje citlivé biomolekuly
● Udržuje redukovaný stav thiolových skupin a zabraňuje oxidaci citlivých proteinů a enzymů během čištění a analýzy.
√ kompatibilní s vodnými systémy
● DTT je rozpustný ve vodě a funguje efektivně v pufrovaných vodných roztocích, což je ideální pro biologické experimenty.
√ Minimalizuje agregaci proteinů
● Snižováním nesprávných disulfidových vazeb DTT pomáhá předcházet nesprávnému složení a agregaci proteinu, což zlepšuje kvalitu a výnos purifikovaných proteinů.
√ Nízká toxicita v laboratorním používání
● Relativně bezpečné zvládnout standardními preventivními opatřeními, takže je preferováno před některými tvrdšími redukčními látkami jako -Mercaptoethanol (BME), což je volatilnější a zapálenější.

Závěr
Dl -1, 4- dithiothreitol 丨 cas 3483-12-3 je nezbytným nástrojem v sadě nástrojů vědců v oblasti života, který nabízí spolehlivé redukci disulfidových vazeb v proteinech, enzymech a nukleových kyselinách. Jeho široké použití v chemii proteinů, molekulární biologii a biotechnologii je nezbytná v rutinních protokolech i pokročilém výzkumu. Navzdory své nestabilitě v řešení zajišťuje jeho účinnost a snadnost použití její pokračující roli ve špičkové vědě.